賽多利斯VN01H02 Sartorius Vivacon 500 超濾離心管用戶指南

——高效樣品濃縮與緩沖液置換的科研利器

一、產(chǎn)品概述

賽多利斯VN01H02 Sartorius Vivacon 500 超濾離心管（貨號：VN01H02）是一款基于離心驅(qū)動的超濾設備，專為蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子的濃縮、脫鹽及緩沖液置換設計。該產(chǎn)品采用Hydrosart®再生纖維素超濾膜，結合垂直膜與狹長流道設計，可實現(xiàn)高回收率與低膜污染風險，適用于法醫(yī)鑒定、生物制藥及基礎研究等領域。

二、技術規(guī)格

• 膜材質(zhì)：Hydrosart®再生纖維素

• 截留分子量（MWCO）：10,000 Dalton

• 容量范圍：0.1–0.5 mL

• 操作溫度：4–40℃

• 離心兼容性：適配2.2 mL錐形底角轉頭或水平轉頭

• 離心條件：

• 推薦轉速：≤7,500 × g（根據(jù)樣品類型調(diào)整）

• 最大耐受轉速：14,000 × g（短時）

• 回收率：≥90%（基于50 ng/mL DNA或0.25 mg/mL細胞色素c的測試數(shù)據(jù)）

三、核心優(yōu)勢

1. 高效濃縮

• 垂直膜設計配合狹長流道，避免濾膜阻塞，顆粒含量高的溶液仍可實現(xiàn)快速超濾。

• 示例：0.5 mL 50 ng/mL DNA溶液濃縮至20 μL，耗時僅25分鐘（7,500 × g）。

2. 低膜污染

• Hydrosart®膜對化學物質(zhì)耐受性強，兼容SDS、Tris-HCl等緩沖體系。

• 流道設計減少濃差極化，延長膜使用壽命。

3. 靈活應用

• 支持DNA、蛋白質(zhì)、肽等樣品的濃縮與脫鹽。

• 可選PCR級型號（如VN01H02-PCR），經(jīng)ETO滅菌處理，消除痕量DNA污染。

四、操作流程

（一）預處理

1. 潤洗：

• 新管使用前，加入超純水至膜上方，冰浴或4℃預冷5分鐘，倒出液體。

• 重復1次，確保膜潤濕。

2. 平衡：

• 將超濾管插入2.2 mL離心管中，使用相同型號空管進行離心平衡。

（二）加樣

1. 樣品量：

• 加入體積不超過管頂白線（通?！?00 μL）。

• 示例：0.5 mL 1 mg/mL BSA溶液。

2. 離心：

• 4℃預冷離心機，設置轉速≤7,500 × g，離心15–30分鐘。

• 示例參數(shù)：7,500 × g、25分鐘（10,000 MWCO膜濃縮0.25 mg/mL細胞色素c）。

（三）濃縮與回收

1. 濃縮判斷：

• 當濾液體積接近1 mL時，取50 μL緩沖液+10 μL濾液，通過Bradford法或電泳檢測蛋白泄漏。

2. 緩沖液置換：

• 濃縮至1 mL后，加入等體積新緩沖液（經(jīng)0.22 μm過濾），重復離心3次。

3. 終體積調(diào)整：

• 根據(jù)需求，將樣品濃縮至≤500 μL（如需更高濃度，可降低轉速至說明書推薦值以下）。

（四）清洗與保存

1. 清洗：

• 使用后，用超純水沖洗3次，再用75%乙醇沖洗1次。

• 殘留水可通過1,000 × g離心1分鐘去除。

2. 保存：

• 干燥后置于4℃或-20℃保存，避免膜干燥開裂。

五、應用案例

1. 蛋白質(zhì)濃縮

• 使用VN01H02將1 mL 0.5 mg/mL BSA濃縮至100 μL，回收率92%（7,500 × g、10分鐘）。

2. DNA脫鹽

• 0.5 mL 50 ng/mL DNA溶液經(jīng)3次緩沖液置換，鹽濃度從150 mM降至10 mM以下。

3. 法醫(yī)樣本處理

• 從血液樣本中分離DNA，結合VN01H02-PCR型號，消除設備痕量DNA污染，確保PCR擴增特異性。

六、質(zhì)量控制與驗證

1. 批次一致性：

• MWCO驗證（電泳法）

• 回收率測試（BSA/DNA標準品）

• 膜完整性檢測（氣泡壓力法）

• 每批次提供CoA（Certificate of Analysis），包含：

2. 性能驗證：

• 重復性測試（n=10）：BSA回收率CV≤3%，DNA濃縮時間CV≤5%。

七、注意事項

1. 操作安全：

• 避免膜干燥，潤濕后保持濕潤狀態(tài)直至使用結束。

• 離心時確保轉子平衡，防止離心機損壞。

2. 樣品兼容性：

• 高粘度樣品（如甘油）需稀釋后使用。

• 強酸/強堿溶液可能腐蝕Hydrosart®膜，需預實驗驗證。

3. 離心條件：

• 離心時間過長可能導致蛋白沉淀，建議分步離心并監(jiān)測濾液狀態(tài)。