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Illumina FC-126-1004 TruSeq Synthetic Long-Read 技術介紹

更新時間:2025-05-19      點擊次數:39
Illumina FC-126-1004 TruSeq Synthetic Long-Read 技術介紹
在基因組學研究領域,獲取高質量、長讀長的測序數據對于深入解析基因組結構與功能至關重要。Illumina 公司推出的 FC-126-1004 TruSeq Synthetic Long-Read 產品,為科研人員提供了創(chuàng)新的解決方案,有效克服了傳統(tǒng)短讀長測序的局限性,在基因組組裝、基因分型等多個方面展現出顯著優(yōu)勢。
一、產品概述
TruSeq Synthetic Long-Read 是一款用于構建 DNA 文庫以生成合成長讀長序列的產品,其配套的文庫制備試劑盒和條形碼試劑盒協(xié)同工作,為復雜基因組研究提供了有力工具 。該產品并非直接生成物理意義上的長讀長測序數據,而是通過巧妙的技術手段,將短讀長數據進行整合與處理,最終合成出具有長讀長特性的序列信息。這一創(chuàng)新策略使得在 Illumina 現有測序平臺基礎上,能夠實現近似長讀長測序的效果,大大拓展了常規(guī)測序平臺的應用范圍。
二、核心技術原理
  1. 高度并行的文庫制備:TruSeq Synthetic Long-Read 技術首先對 DNA 樣本進行高度并行的文庫制備 。將基因組 DNA 隨機片段化后,在每個片段兩端連接上特定的接頭序列。這些接頭不僅有助于后續(xù)的 PCR 擴增和測序反應,還包含了用于識別和追蹤不同 DNA 片段的索引信息。通過這種方式,大量的 DNA 片段被同時處理,為后續(xù)生成合成長讀長奠定了基礎。

  1. 短讀長數據的本地組裝:在測序過程中,首先按照常規(guī)的 Illumina 測序方法獲得大量短讀長序列 。這些短讀長序列包含了原始 DNA 片段的部分信息。隨后,利用先進的算法和生物信息學工具,對這些短讀長數據進行本地組裝。通過識別短讀長之間的重疊區(qū)域,將它們逐步拼接起來,從而構建出更長的合成序列。在這個過程中,由于每個短讀長的測序準確性較高(Illumina 測序技術本身具有高準確性),通過合理的組裝策略,能夠有效降低合成長讀長中的錯誤率,保證最終序列的可靠性。

  1. 的索引與拼接策略:配套的條形碼試劑盒發(fā)揮著關鍵作用 。其中包含 384 個索引,用于標記每個反應孔中的樣本。在測序完成后,利用這些索引信息,可以準確地將來自同一原始 DNA 分子的短讀長序列進行歸類和拼接。這種基于索引的拼接策略,極大地提高了合成長讀長的準確性和成功率,能夠更精準地還原基因組的真實序列,尤其是在處理高度重復序列區(qū)域時,相比傳統(tǒng)短讀長測序,能夠有效減少序列錯配和遺漏的問題。

三、產品性能優(yōu)勢
  1. 高準確性的長讀長合成:TruSeq Synthetic Long-Read 技術生成的合成長讀長具有的準確性,錯誤率可低至 0.03%/ 堿基 。這一的性能得益于其基于高質量短讀長數據的組裝方式,以及嚴格的質量控制流程。高準確性的長讀長數據對于準確識別基因組中的變異,如單核苷酸多態(tài)性(SNP)、插入缺失(InDel)以及結構變異(SV)等至關重要。在研究復雜疾病的遺傳機制時,能夠精準地檢測到與疾病相關的微小變異,為疾病診斷和治療提供可靠依據。

  1. 出色的基因組覆蓋度:通過優(yōu)化的文庫制備和長讀長合成策略,該產品能夠實現對基因組的全面覆蓋 。尤其是對于傳統(tǒng)測序方法難以觸及的高 GC 含量區(qū)域、重復序列區(qū)域以及基因間區(qū)等復雜區(qū)域,TruSeq Synthetic Long-Read 技術能夠有效提升覆蓋度。在對動植物基因組進行測序時,能夠更完整地獲取基因組信息,挖掘出更多潛在的功能基因和調控元件,為物種進化、遺傳育種等研究提供更豐富的數據資源。

  1. 強大的復雜區(qū)域解析能力:基因組中的重復序列和結構變異往往是研究的難點,因為它們容易導致測序數據的混淆和錯誤拼接 。TruSeq Synthetic Long-Read 技術憑借長讀長優(yōu)勢,能夠跨越這些復雜區(qū)域,準確解析重復序列的結構和分布,精確識別各類結構變異,如倒位、易位等。在腫瘤基因組研究中,能夠清晰地揭示腫瘤細胞中基因組的重排和變異情況,有助于深入了解腫瘤的發(fā)生發(fā)展機制,為腫瘤的精準治療提供關鍵線索。

四、應用領域
  1. 基因組從頭組裝:在新物種基因組測序和未知基因組研究中,基因組從頭組裝是關鍵步驟 。TruSeq Synthetic Long-Read 技術生成的長讀長數據能夠顯著提高組裝的連續(xù)性和準確性,有效減少基因組中的缺口和錯誤拼接。通過將合成長讀長與傳統(tǒng)短讀長數據相結合,可以構建出更為完整、準確的基因組草圖,為后續(xù)基因注釋、功能研究等工作奠定堅實基礎。例如在對新發(fā)現的微生物基因組進行測序時,能夠快速、準確地完成基因組組裝,揭示其的遺傳信息和代謝途徑。

  1. 基因組結構變異分析:結構變異在生物進化、疾病發(fā)生發(fā)展等過程中發(fā)揮著重要作用 。該產品能夠精準檢測基因組中的各種結構變異,包括拷貝數變異(CNV)、染色體易位、倒位等。在人類遺傳學研究中,通過對大量個體的基因組進行結構變異分析,可以發(fā)現與遺傳性疾病相關的結構變異位點,為疾病的早期診斷和遺傳咨詢提供重要依據。在植物育種領域,結構變異分析有助于挖掘與優(yōu)良性狀相關的基因,加速品種改良進程。

  1. 單倍型分析與基因分型:準確的單倍型分析對于理解遺傳多樣性、疾病關聯(lián)分析以及群體遺傳學研究具有重要意義 。TruSeq Synthetic Long-Read 技術能夠通過長讀長數據準確確定等位基因的連鎖關系,實現高精度的單倍型分型。在人類群體遺傳學研究中,通過分析不同人群的單倍型分布,可以追溯人類的遷徙歷史和遺傳演化路徑;在疾病研究中,單倍型分析有助于識別與復雜疾病易感性相關的遺傳標記,為個性化醫(yī)療提供更精準的信息。

五、產品使用說明
  1. 樣本要求:該產品適用于多種類型的 DNA 樣本,如基因組 DNA、FFPE 樣本來源的 DNA 等 。為確保實驗成功,樣本應具備較高的質量和完整性,建議使用高質量的純化 DNA,起始量一般在 0.1 - 1 μg 之間,具體用量可根據樣本類型和實驗要求進行適當調整。在樣本處理前,需對樣本進行嚴格的質量檢測,包括濃度測定、純度評估以及完整性分析等,確保樣本符合實驗要求。

  1. 實驗操作流程:使用 TruSeq Synthetic Long-Read 產品構建文庫的操作流程相對簡便,但需嚴格按照說明書進行 。首先,將 DNA 樣本進行片段化處理,可采用物理或酶切方法,獲得適宜長度的 DNA 片段。然后,進行末端修復、加 A 尾以及連接特定接頭等操作,這些步驟均在試劑盒提供的專用試劑和優(yōu)化的反應條件下進行。接下來,利用條形碼試劑盒中的索引對樣本進行標記,以便后續(xù)區(qū)分不同樣本。最后,通過 PCR 擴增富集文庫片段,并對文庫進行純化和質量檢測,確保文庫的質量和濃度符合測序要求。

  1. 數據分析:測序完成后,可利用 Illumina BaseSpace Sequence Hub 中的專用分析工具進行數據分析 。例如,TruSeq Long-Read Assembly App 能夠將短讀長數據組裝成合成長讀長,用于準確的基因組組裝和基因組完成工作;TruSeq Phasing Analysis App 則可用于基因組的基因分型分析,識別單倍型信息、共遺傳等位基因以及新出現的突變。這些分析工具操作簡便,能夠快速、準確地從測序數據中提取有價值的生物學信息,為科研人員的研究工作提供有力支持。



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