Towbin 緩沖液：經(jīng)典的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)印緩沖液，由 Tris、甘氨酸和甲醇組成。Tris 和甘氨酸維持緩沖體系的 pH 穩(wěn)定，甲醇能降低凝膠的孔徑，防止蛋白質(zhì)在轉(zhuǎn)印過程中擴(kuò)散，有助于蛋白質(zhì)從凝膠向膜上轉(zhuǎn)移。常用于半干轉(zhuǎn)印和濕轉(zhuǎn)印，適用于大多數(shù)蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)印，但甲醇對某些蛋白質(zhì)的活性可能有影響 。

CAPS 緩沖液：主要成分是 3 - 環(huán)己胺 - 1 - 丙磺酸（CAPS）和甲醇，pH 一般調(diào)節(jié)至 10.5 左右。相比 Towbin 緩沖液，CAPS 緩沖液更適合堿性條件下對蛋白質(zhì)活性要求較高的轉(zhuǎn)印，尤其適用于高分子量蛋白質(zhì)和糖蛋白的轉(zhuǎn)印，能較好地保持蛋白質(zhì)的生物活性 。

Pierce 1 - Step Transfer Buffer（Thermo Scientific）：可用于從聚丙烯酰胺凝膠（SDS - PAGE）到硝酸纖維素或 PVDF 膜的快速半干轉(zhuǎn)印，適用于分子量在 10 - 300kDa 的蛋白質(zhì)。該緩沖液使用方便，能有效促進(jìn)蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)移，簡化轉(zhuǎn)印流程，節(jié)省實(shí)驗(yàn)時(shí)間 。

硝酸纖維素膜（NC 膜）：蛋白質(zhì)結(jié)合能力強(qiáng)，非特異性吸附低，能與蛋白質(zhì)通過疏水作用和離子鍵結(jié)合。其優(yōu)點(diǎn)是價(jià)格相對較低，檢測信號(hào)清晰，適用于多種檢測方法，如化學(xué)發(fā)光法、顯色法等。但機(jī)械強(qiáng)度較差，易脆裂，操作時(shí)需小心，且在潮濕環(huán)境中容易變形 。

聚偏二氟乙烯膜（PVDF 膜）：具有較高的蛋白質(zhì)結(jié)合能力和化學(xué)穩(wěn)定性，機(jī)械強(qiáng)度好，不易破損，便于操作和后續(xù)處理，如多次重復(fù)檢測。疏水性強(qiáng)，使用前需用甲醇等有機(jī)溶劑進(jìn)行預(yù)處理以活化膜表面，增強(qiáng)蛋白質(zhì)結(jié)合力，常用于 Western Blot 等對蛋白質(zhì)檢測要求較高的實(shí)驗(yàn) 。

尼龍膜：機(jī)械強(qiáng)度高，耐磨損，能耐受較劇烈的實(shí)驗(yàn)條件。與蛋白質(zhì)的結(jié)合能力較強(qiáng)，適用于核酸和蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)印。但尼龍膜的非特異性吸附相對較高，在使用時(shí)需要進(jìn)行封閉處理以降低背景信號(hào) 。

脫脂奶粉：常用的封閉劑之一，主要成分是酪蛋白，價(jià)格便宜，能有效封閉膜上的非特異性結(jié)合位點(diǎn)，降低背景信號(hào)。但由于含有少量生物素和堿性磷酸酶，在使用生物素 - 親和素系統(tǒng)或堿性磷酸酶標(biāo)記的二抗進(jìn)行檢測時(shí)，可能會(huì)產(chǎn)生非特異性信號(hào) 。

牛血清白蛋白（BSA）：是一種純度較高的封閉試劑，非特異性結(jié)合低，適用于各種檢測系統(tǒng)，尤其在對背景要求嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)良好。不過價(jià)格相對脫脂奶粉較高，對于大規(guī)模實(shí)驗(yàn)可能成本較高 。

Blocking One Solution（Nacalai Tesque）：一種現(xiàn)成的封閉溶液，使用方便，封閉效果好，能有效減少非特異性背景，可用于多種免疫檢測實(shí)驗(yàn)，節(jié)省實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備時(shí)間 。

DAB（3,3'- 二氨基聯(lián)苯胺）：經(jīng)典的顯色底物，與 HRP 反應(yīng)后產(chǎn)生棕色沉淀，顯色結(jié)果直觀，便于觀察和拍照記錄。但 DAB 具有一定的毒性，使用時(shí)需注意防護(hù) 。

NBT/BCIP（硝基藍(lán)四唑 / 5 - 溴 - 4 - 氯 - 3 - 吲哚磷酸）：常用于堿性磷酸酶（AP）標(biāo)記的二抗檢測，反應(yīng)后產(chǎn)生藍(lán)紫色沉淀，靈敏度較高，適用于多種膜材料 。

Amersham ECL Start Western Blotting Detection Reagent（Cytiva）：基于魯米諾的化學(xué)發(fā)光底物，靈敏度高，適用于常規(guī)和驗(yàn)證性 Western Blotting 實(shí)驗(yàn)。與辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的二抗結(jié)合后，在化學(xué)反應(yīng)中產(chǎn)生光信號(hào)，通過曝光顯影呈現(xiàn)蛋白質(zhì)條帶 。

SuperSignal West Pico PLUS Chemiluminescent Substrate（Thermo Scientific）：具有超高靈敏度，能夠檢測到低豐度蛋白質(zhì)，適用于需要檢測微量蛋白質(zhì)的實(shí)驗(yàn)。發(fā)光信號(hào)強(qiáng)且穩(wěn)定，可延長曝光時(shí)間以獲取更清晰的條帶 。

化學(xué)發(fā)光底物：

顯色底物：

一抗：特異性識(shí)別目標(biāo)蛋白質(zhì)的抗體，根據(jù)來源可分為鼠源、兔源、羊源等；根據(jù)制備方法可分為多克隆抗體和單克隆抗體。多克隆抗體能識(shí)別多個(gè)抗原表位，靈敏度較高，但特異性可能相對較低；單克隆抗體特異性強(qiáng)，識(shí)別單一抗原表位，但可能存在親和力較低的問題 。

二抗：與一抗結(jié)合的抗體，通常標(biāo)記有酶（如 HRP、AP）或熒光基團(tuán)。通過與一抗結(jié)合，二抗可將標(biāo)記物引入檢測體系，實(shí)現(xiàn)對目標(biāo)蛋白質(zhì)的檢測。標(biāo)記有酶的二抗配合相應(yīng)的底物進(jìn)行顯色或化學(xué)發(fā)光檢測，標(biāo)記有熒光基團(tuán)的二抗則可通過熒光顯微鏡等設(shè)備進(jìn)行觀察和分析 。